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Taq DNA聚合酶的分类
点击次数:616 发布时间:2017-12-13

Taq DNA聚合酶有几种,除了普通扩增用的Taq DNA聚合酶外,还有以下几种特意性Taq DNA聚合酶
a,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10 -5 碱基 / 循环数,而高保真 Taq 酶错配率可降到 10 -6 数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对 PCR 保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘ 到 5’ 核酸外切酶的活性。目前市面上主要有两类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。
b,热启动Taq酶(高特异Taq酶):在 PCR *个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时 Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。
c,高耐热Taq酶: 对于有些模板变性温度较高,需要时间较长,可能要求高耐热性 Taq 酶,如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列,两者都是从海底火山口分离出来后克隆的,是普通 Taq 酶耐热性的三倍以上,前者在 95°C 半衰期近 7 小时, 100°C 近 2 小时;而后者分别为 23 小时和 8 小时。
d,超长片段扩增Taq酶:对于作基因组图谱、测序及分子遗传学研究的科研人员,可能会用到超长片段的扩增, Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶, Proofreading 酶和热启动抗体,对复杂模板可扩增 10kb 片段,简单模板可达 40kb 。

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