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腾骞生物分享实验室常用六种耐热DNA聚合酶
点击次数:397 发布时间:2018-01-17
耐热dna聚合酶多应用在PCR技术中。各种耐热DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除错配,切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。由于上述这些不同,可以将耐热DNA聚合酶分为三类:  
一、普通耐热DNA聚合酶  
由一种水生栖热菌yT1株分离提取出,是发现的耐热DNA聚合酶中活性zui高的一种,达200,000单位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。  
TaqDNA聚合酶还要具有非模板依赖性活性,可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾,故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾;另一方面,在仅有dTTP存在时,它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾,产生3'端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性,可实现PCR产物的T-A克隆法。  
TthDNA聚合酶  
从ThermusthermophilusHB8中提取而得,该酶在高温和MnCl2条件下,能有效地逆转录RNA;当加入Mg2+后,该酶的聚合活性大大增加,从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。  
二、高保真DNA聚合酶  
pfuDNA聚合酶  
是从Pyrococcusfuriosis中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR扩增过程中产生的错误,使产物的碱基错配率极低。PCR产物为平端,无3'端突出的单A核苷酸。  
VentDNA聚合酶  
该酶是从Litoralis栖热球菌中分离出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除错配的碱基,具有校对功能。  
三、DNA序列测定中应用的耐热DNA聚合酶  
BcaBestDNA聚合酶  
从BacillusCaldotenaxYT-G菌株中提纯,并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸长性能优越;可抑制DNA二级结构形成,可以得到均一的DNA测序带。  
SacDNA聚合酶  
从酸热浴流化裂片菌中分离,无3'-5'外切酶活性,可用于DNA测序,但测序反应中ddNTP/dNTP的比率要高。  
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