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RNA提取试剂盒提取植物RNA失败的原因分析
点击次数:341 发布时间:2018-02-17
很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分,造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取由于时间太长,太繁琐,手工方法不在讨论之列。
下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因:
市面上zui常见的RNA提取试剂盒无非是两种:*种:TRIzol改良类方法(包括溶液型的和离心柱型的)、第二种:直接裂解过柱子的方法(离心柱)
*种RNA提取试剂盒失败的原因1:RNA市面上面zui流行的方法就是Trizol,或者Triol改良,或者Trizol加离心柱一类的改良方法。trizol也就是异硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法zui适合的对象是动物源性的组织细胞,针对普通多糖多酚低的植物性的材料,TRIzol类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下,trizol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰,要么残留大量DNA,要么残留大量苯酚,氯仿,氧化破坏RNA,或者残留这些多糖多酚,色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制,市面上尽大多数的国产厂家是使用trizol的方法进行改良,无论是不是加了离心柱。但是实践证实,改良不能从根本上解决题目。判定是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单:是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿,假如使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二种RNA提取试剂盒失败的原因:直接裂解过柱子的方法是目前zui先进的方法,但是也是技术含量zui高的方法。这个方法采用裂解液(不含苯酚,氯仿)直接裂解,RNA/DNA同时过柱子,然后在柱子上面直接分离RNA/DNA,所以,这种方法的优点*在于,避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离RNA/DNA的弊端、第二在于,不使用有毒的苯酚氯仿。*,裂解液的成分必须针对往除多糖多酚进行研发添加往多糖多酚,代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的题目。第二、和trizol原理不同,直接过柱法DNA/RNA同时加到吸附柱上往。如何往除DNA是*个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有把握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司由于没有把握*难点,裂解液里面没有往除多糖多酚成分,所以包括qiagen的盒子也经常不能成功提取植物RNA样品。
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