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说了这么多的RNA提取试剂以下几点你肯定不知道
点击次数:714 发布时间:2022-01-16
 
  RNA提取试剂提供了一种快速,简单,经济有效的方法,可从全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和真菌细胞中分离总RNA。优化的洗涤剂和离液盐用于裂解细胞并灭活核糖核酸酶。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。纯的RNA用RE缓冲液洗脱,不用酚提取或醇沉淀。
  RNA提取试剂主要物质是异硫氰酸胍,它可以破坏细胞使rna释放出来的同时,保护rna的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。rna存在于水样层中。收集上面的的水样层后,rna可以通过异丙醇沉淀来还原。
  无论是人、动物、植物还是细菌组织,trizol法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>;107)均有较好的分离效果。RNA提取试剂TrizolReagent操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。trizol抽提的总rna能够避免dna和蛋白的污染。故而能够作rna印迹分析、斑点杂交、poly(a)+选择、体外翻译、rna酶保护分析和分子克隆。提取时需要注意一些问题:提取时要做到超净台内操作、操作带一次性手套、ep管及tip头都要用0.1%处理(0.1%depc浸泡过夜后,高压蒸气灭菌)、小心、细致、晃动及每次移液要轻。这样做的*目的就是两个,一是小心rnase的污染降解rna;二是动作过度暴力破坏rna的完整性。
  另外你提的rna做电泳的问题,一般rna电泳应该是做甲醛变性电泳,但是一般的琼脂糖电泳也可以,需要上样量稍微大些,并且跑电泳的时间越短越好。
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