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详解Spectrumlabs即用透析袋的使用方法
点击次数:428 发布时间:2017-11-26
透析已成为生物化学实验室zui简便zui常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。那Spectrumlabs即用透析袋是怎样使用的呢?
1、透析的原理
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
2、透析袋的材质与规格
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的zui多的还是用纤维素(再生纤维素 RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美国光谱医学公司(spectrum)生产的各种尺寸的透析管。截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的zui小分子量,缩写为MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。截留分子量越大也就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留的分子越小要求透析袋越密,价格越贵。商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm-77mm不等。
半透膜制成的透析袋作为工具,存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。目前已有专为10到100ul的微量样品透析而设计的透析工具。把样品加在平底的透析管(类似小量提质粒的离心纯化柱,可以插入1.5ml的离心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于缓冲液面10min即完成透析。实验表明,100ul pH2.8的IgG洗脱液在1L pH9.4的缓冲液中只需不到10min即可平衡到pH9.4。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率,能够节约珍贵的样品,并能节约时间,特别适合摸条件的预实验。
Spectrumlabs即用透析袋的标识:
27mm(MD34)透析袋(MW:3500)
27mm是指透析袋干燥时的直径。
MD34mm是指透析袋干燥时压平的宽度。
MW:3500是指透析袋的截留分子量。
 
 

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