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浅看植物DNA提取试剂盒从植物培养细胞中提取基因组DNA
点击次数:101 发布时间:2022-03-27
 
  植物DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯苄的这一特性,将植物样品冻结融解后,再使用PipetTip的尖将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比,省去了液氮研磨等烦琐步骤,有利于一次性处理大量样品。而且,本制品经过了改良,热处理时间只需15分钟,使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。
  植物DNA提取试剂盒从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA
  ①按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
  *如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一SpinColumn中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个SpinColumn上。
  如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。
  注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。
  ②将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700μl的SolutionA和1.2μl的RNaseA1,用力碾磨30秒。
  ③收集650μl研磨好的组织匀浆移至CollectionTube中。如匀浆体积不足650μl,请补充SolutionA至650μl。65℃保温15分钟。
  注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。
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